安装注意事项
(1)台面要求坚实、平整,防帽离心机在工作时产生振动或仪器移动。
1%SDS溶解沉淀
离心:10000g,10min,4度
取上清-20度保存(或可直接用于WESTERNBLOT)
存在的问题:加入1%SDS后沉淀不溶解,还是很大的一块,4度离心后又多了白色沉定,SDS结晶?测浓度,含量才1mg/ml左右。
五、蛋白质样品制备
秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5ml10%三(丙酮配制,含10mM即0.07%β-),混匀,-20℃沉淀1小时,4℃,15000r/min离心15min,弃上清,沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-),再于-20℃沉淀1小时,同上离心弃上清,(有必要再用80%丙酮(含10mMβ-所得沉淀低温冷冻真空抽干。
这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
二、植物组织蛋白质提取方法
氯醋酸—丙酮沉淀法